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創(chuàng)傷弧菌的制備及鑒定

更新時(shí)間:2019-06-06  |  點(diǎn)擊率:1282

       創(chuàng)傷弧菌屬革蘭氏陰性弧菌。在液體培養(yǎng)基中菌體大小為0.7*2-3μm,稍彎曲。在固體培養(yǎng)基中呈多樣性。有單鞭毛。培養(yǎng)特性:營(yíng)養(yǎng)要求一般,MAX適生長(zhǎng)溫度為30℃,兼性厭氧。在無NaCl及超過8%NaCl的培養(yǎng)基中不生長(zhǎng),可在0.5%NaCl及3%NaCl的蛋白胨水中生長(zhǎng),在含6%NaCl的蛋白胨水中生長(zhǎng)良好。

         非冷凍樣品采集后應(yīng)立即置7℃~10℃生化培養(yǎng)箱保存,盡可能及早檢驗(yàn);冷凍樣品應(yīng)在45 ℃以下不超過15 min或在2℃~5℃不超過18 h解凍;如果樣品需要冷凍貯存,應(yīng)在樣品中加等量緩沖甘油-氯化鈉溶液(液體樣品應(yīng)加雙料),推薦貯存溫度為-70 ℃以下。
甲殼類,則應(yīng)先在自來水中洗刷外殼并甩干表面水分,然后以無菌操作打開外殼,按上述要求取相應(yīng)部分。
       以無菌操作取檢樣25 g(mL),加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225 mL,用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8 000 r/min均質(zhì)1 min,或拍擊式均質(zhì)器拍擊2 min,制備成1:10的均勻稀釋液。如無均質(zhì)器,則將樣品放入無菌乳缽中磨碎,然后放在500 mL的滅菌容器內(nèi),加225 mL 3%氯化鈉堿性蛋白胨水,并充分振蕩。魚類和頭足類動(dòng)物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部?jī)?nèi)容物,包括貝肉和體液;甲殼類取整個(gè)動(dòng)物,或者動(dòng)物的中心部分,包括腸和鰓。
        嗜鹽性試驗(yàn):挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落,分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水,生化培養(yǎng)箱內(nèi)36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h,觀察液體混濁情況。創(chuàng)傷弧菌在無氯化鈉、8%氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長(zhǎng),在6%氯化鈉的胰胨水中生長(zhǎng)旺盛。
氧化酶試驗(yàn):挑選純培養(yǎng)的單個(gè)菌落進(jìn)行氧化酶試驗(yàn),創(chuàng)傷弧菌為氧化酶陽(yáng)性。
涂片鏡檢:將可疑菌落涂片,進(jìn)行革蘭氏染色,鏡檢觀察形態(tài)。創(chuàng)傷弧菌為革蘭氏陰性,呈棒狀或弧狀。
        挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落,轉(zhuǎn)種3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層,36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果。創(chuàng)傷弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑,無氣泡,斜面顏色不變或紅色加深,偶爾斜面變黃。
        V-P試驗(yàn):以接種針由3%氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面挑取少許培養(yǎng)物穿刺3%氯化鈉MR-VP培養(yǎng)基,36℃±1 ℃培養(yǎng)24 h,在加V-P試劑前應(yīng)先觀察動(dòng)力。沿穿刺線周圍呈擴(kuò)散性生長(zhǎng)為動(dòng)力陽(yáng)性。

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